破伤风杆菌Clostridium tetani结论！破伤风杆菌观察用显微镜采购！
信息分类：生命科学小百科 作者:YIYI发布
破伤风杆菌Clostridium tetani结论！破伤风杆菌观察用显微镜采购！
实验名称：Spore stain
实验原理：
因为孢子类似抗酸菌很难被染色。如用普通染色法则菌体是深色，孢子却因染不上而呈现透明。所以，
要采用Wirtz-Conklin method染孢子，染上色后将如同结核菌一样无法用脱色剂脱色。
实验目的：
观察Clostridium tetani(破伤风杆菌)和Clostridiumsporogenes经过Spore stain后所呈现的形状。
实验材料：薄抹片、malachite green(5%)、火焰、Safranin、显微镜油镜。
实验方法：Wirtz-Conklin method如下：
制作薄抹片，加入malachite green(5%)。
用火焰在其下慢慢轻轻地烧，见其产生白烟，稍微移开后再烧。如此持续5min.，促使孢子上色。
背面冲水后，将水甩掉。
用Safranin(番红)做背景染色30sec.。
背面冲水后，在空气中待其乾燥。
用显微镜油镜镜检。
实验结果：孢子的地方染上绿色后即不易脱色，其他地方则呈现背景颜色(红色)。
Clostridium tetani(破伤风杆菌)形成terminal spore，状似鼓棒(drum stick)。Spore处是绿色，杆状处是红色。
Clostridium sporogenes犹如糖果状，中央孢子处是绿色，两旁是红色。
实验讨论：
Clostridium tetani (破伤风杆菌)除了可以用镜检外还可用体外隔离，不过这两种方法都不是很成功。
Clostridium sporogenes和Clostridium tetani一样在镜检下也不是很成功，通常是因为孢子不易染色的关系。
Clostridium tetani和Clostridium sporogenes都是厌气菌，为了作为实验材料而培养时，用猪肝、猪肝汤再经高温、
高压灭菌作为medium的效果很好(可能是因为养分充足，有glutathione，作用类似cystine、arginine为还原剂，可将O2锁住的关系)。
Clostridium tetani可以从临床上来诊断，病人通常有伤口、牙关紧闭(由于三叉神经运动分支障碍，导致咀嚼肌强直，病人的嘴不由自主地紧闭，称为trismus或lockjaw)、且曾有免疫缺失的情况。若直接从伤口取出Clostridium来做抹片染色的材料，并不能确认一定是C. tetani。所以取出后可以直接在blood agar或转移到cooked meat medium(加热800C，10~15min.以破坏非孢子物)。在blood agar经过24小时的培养后，将发现呈现聚集的情况(因为C. tetani是有运动性的)。
经过Spore stain后，将发现犹如网球拍状的terminal spores。
进一步的确认是藉由侦测它的neurotoxin产物。方法是从C. tetani的纯培养液中抽取滤液并注射到老鼠腿中，另一只则多加了tetanus antitoxin。几个小时后，未受保护的老鼠腿部出现僵硬和肌肉痉挛并延伸到尾部，然后到另一条腿上。受保护的老鼠则倖免于难。
Clostridium sporogenes是一种非致病性的细菌。它通常和Clostridium perfringens (Welch's bacillus)，Clostridium novyi，和Clostridium septicum等细菌一起存在。它们如同腐生菌般存在于土壤和人及动物的肠道。当伤口接触到被粪便汙染的土壤，感染就发生了。大部分绝对厌氧、产毒、可形成孢子的G(+)细菌便会感染伤口而造成一种致命的疾病，我们称为Gas gangrene(气性坏疽)或Clostridial myonecrosis、Clostridial myositis。有75%与Cl. perfringens相关，1/3是以Cl. perfringens为致病原。
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