1. 準备乾淨的玻片(玻片处理如实验3-1)。
2. 使用灭菌的接种环,制备含有Escherichia coli或Staphylococcus aureus的抹片。
3. 让抹片乾燥,以一般加热固定法固定。
4. 置1~2滴crystal violet于抹片处,静置1分钟。
5. 以自来水冲洗(由玻片上缘轻轻冲洗至无色)。
6. 滴1~2滴Gram's iodine溶液于抹片处,静置1分钟。
7. 以自来水冲洗(由玻片上缘轻轻冲洗至无色)。
8. 以95%酒精或丙酮退色。注意:脱色剂要一滴一滴的加,直至洗出液不再呈现
crystal violet颜色即刻停止,否则过度脱色会获得相反的染色结果。
9. 用水龙头的自来水冲洗(由玻片上缘轻轻冲洗至无色)。
10. 以safranin O做对照染色,静置30~45秒。
11. 用水龙头的自来水冲洗。
12. 乾燥。
13. 镜检,利用物镜100x的油镜观察。