观察螺旋菌的形态用什么样的显微镜最好？专业供应相位差显微镜
信息分类：生命科学小百科 作者:YIYI发布
实验名称：Spirochetes
实验原理：
Phase-contrast Microscopy是把位像差转成亮度差，用以观察活菌体的内部构造。
Dark field microscopy是利用绕射光，用以观察透射光线难以观察的菌体。
实验目的：观察螺旋菌的形态。
实验材料：Phase-contrast Microscope 、Dark field microscope、Spirochetes。
实验方法：
我们可以直接用Phase-contrast Microscopy来观察，标本不需要等殊的準备或染色，即可产生对比之显像作用。
除此之外，也可用Dark field microscopy法，藉由1000X的darkfield油镜来观察。要注意的是玻片的厚度是重要的，必须有1.0~1.1mm厚。
实验结果：
Treponemes若出现在损伤物质中，是长的(5~20μm)、纤细的、紧密螺旋的Spirochetes，移动很慢(呈罕见的螺旋形移动)且可能在中央呈现弯曲。
对于这种难培养的微生物，用Phase-contrast Microscopy，即可清楚地看出它的形态。若用Dark field microscopy来观察，也可以看出形态。
实验讨论：
Phase-contrast Microscopy是由荷兰的一位科学家Fritz Zerniche所发明的，并在1935年获得诺贝尔物理奖。主要的原理是利用改变通过标本的光线的位相关系，而产生对比之显像作用。
用Dark field microscopy法观察时，由于充满着的活spirochetes可能有高的传染性，所有的设备、病人样本都要小心处理，立即抛弃受汙染的物质。看到的细菌在空泡、亮光处，为透明实像。若用特殊处理的显微镜看则是黑色较大的虚像。
另外，我们也可以用间接免疫萤光法来确认细菌，如Treponema pallidum。将专一性抗体溶液加在切片上，再加入标有萤光物质的专一性抗免疫球蛋白之抗体，然后在紫外线萤光显微镜下观察。
Treponema pallidum被固定在玻片上并加入病人的血清。然后冲洗并加入标有萤光物质的专一性抗免疫球蛋白之抗体。假如有T. pallidum的病人血清和这种抗体反应，细菌将被染色(呈＋反应，见下图)。假如没有反应发生，萤光抗体将从抹片上被冲走，也就不会有萤光细菌被看到了(呈－反应)。
为了避免产生交叉反应，病人血清要先用Reiter treponeme的抽取物来吸附，我们称这种方法为fluorescent treponemal antibody absorption(FTA-ABS)test，有很高的专一性。
其他血清学上的IF test有：
VDRL(Veneral Disease Research Lab)、RPR(Rapid Plasma Reagin) test：测量病人血清中cardiolipin antigen的凝集。
MHA.TP(Microhaemagglutination test for T. pallidum.)：针对T.pallidum 所做的微小红血球凝集试验。
TPCF(T. pallidium compliment fixation test)：检出率高，但每天都要做一次。
TPI(T. pallidum immobilization test)：比较贵，主要是使螺旋菌失去运动性，而固定不动。
Microscopy适用于初期、第二期和生殖期，由skin lesions取分泌物，而不是从oral lesions。因为含有Spirochetes的正常口腔中通常有非致病性却又像T. pallidum的细菌，导致误诊机率大。
其他的染色法有：
Gimesa stain：先用methanol细流，再用Gimesa solution。但是染起来不很理想。
Fontana stain：先用媒染剂细流，再用silver nitrate solution。
Negative Demonstration of Spirochetes--India ink method：背景为墨水的黑色，细菌处是空泡、透明状。
由于Spirochetes不但厌氧且需要很高的营养，所以大部分是培养不出的。Treponema至目前为止不能用人工培养基培养。
至于螺旋体的抗药性很弱，只有人和人之间的直接接触才会有高传染性，间接感染的情况则相当低。
实验原理：
Phase-contrast Microscopy是把位像差转成亮度差，用以观察活菌体的内部构造。
Dark field microscopy是利用绕射光，用以观察透射光线难以观察的菌体。
实验目的：观察螺旋菌的形态。
实验材料：Phase-contrast Microscope 、Dark field microscope、Spirochetes。
实验方法：
我们可以直接用Phase-contrast Microscopy来观察，标本不需要等殊的準备或染色，即可产生对比之显像作用。
除此之外，也可用Dark field microscopy法，藉由1000X的darkfield油镜来观察。要注意的是玻片的厚度是重要的，必须有1.0~1.1mm厚。
实验结果：
Treponemes若出现在损伤物质中，是长的(5~20μm)、纤细的、紧密螺旋的Spirochetes，移动很慢(呈罕见的螺旋形移动)且可能在中央呈现弯曲。
对于这种难培养的微生物，用Phase-contrast Microscopy，即可清楚地看出它的形态。若用Dark field microscopy来观察，也可以看出形态。
实验讨论：
Phase-contrast Microscopy是由荷兰的一位科学家Fritz Zerniche所发明的，并在1935年获得诺贝尔物理奖。主要的原理是利用改变通过标本的光线的位相关系，而产生对比之显像作用。
用Dark field microscopy法观察时，由于充满着的活spirochetes可能有高的传染性，所有的设备、病人样本都要小心处理，立即抛弃受汙染的物质。看到的细菌在空泡、亮光处，为透明实像。若用特殊处理的显微镜看则是黑色较大的虚像。
另外，我们也可以用间接免疫萤光法来确认细菌，如Treponema pallidum。将专一性抗体溶液加在切片上，再加入标有萤光物质的专一性抗免疫球蛋白之抗体，然后在紫外线萤光显微镜下观察。
Treponema pallidum被固定在玻片上并加入病人的血清。然后冲洗并加入标有萤光物质的专一性抗免疫球蛋白之抗体。假如有T. pallidum的病人血清和这种抗体反应，细菌将被染色(呈＋反应，见下图)。假如没有反应发生，萤光抗体将从抹片上被冲走，也就不会有萤光细菌被看到了(呈－反应)。
为了避免产生交叉反应，病人血清要先用Reiter treponeme的抽取物来吸附，我们称这种方法为fluorescent treponemal antibody absorption(FTA-ABS)test，有很高的专一性。
其他血清学上的IF test有：
VDRL(Veneral Disease Research Lab)、RPR(Rapid Plasma Reagin) test：测量病人血清中cardiolipin antigen的凝集。
MHA.TP(Microhaemagglutination test for T. pallidum.)：针对T.pallidum 所做的微小红血球凝集试验。
TPCF(T. pallidium compliment fixation test)：检出率高，但每天都要做一次。
TPI(T. pallidum immobilization test)：比较贵，主要是使螺旋菌失去运动性，而固定不动。
Microscopy适用于初期、第二期和生殖期，由skin lesions取分泌物，而不是从oral lesions。因为含有Spirochetes的正常口腔中通常有非致病性却又像T. pallidum的细菌，导致误诊机率大。
其他的染色法有：
Gimesa stain：先用methanol细流，再用Gimesa solution。但是染起来不很理想。
Fontana stain：先用媒染剂细流，再用silver nitrate solution。
Negative Demonstration of Spirochetes--India ink method：背景为墨水的黑色，细菌处是空泡、透明状。
由于Spirochetes不但厌氧且需要很高的营养，所以大部分是培养不出的。Treponema至目前为止不能用人工培养基培养。
至于螺旋体的抗药性很弱，只有人和人之间的直接接触才会有高传染性，间接感染的情况则相当低。
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