微生物学的研究方法，显微镜的分类及原理
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
微生物学的研究方法
第一节 微生物检视法
第二节 微生物染色法
第三节 微生物血清学检查
第四节 微生物分子生物学检查
第一节 微生物检视法
显微镜的分类及原理
显微镜可分为光学显微镜(light microscope)和电子显微镜(electron microscope)两类。光学显微镜是利用镜片将光线经数次折射而放大物体影像。电子显微镜则以电子束取代光线，磁场取代镜片；如此能增加其解像力，用于观察更细微的构造。
电子显微镜又可分为观察细胞内部构造的穿透式电子显微镜，和观察细胞表面的扫瞄式电子显微镜。
不过电子显微镜颇为庞大且昂贵，多用于研究为主。
一般医院、检验室、实验室的使用，则以光学显微镜为主。
其他尚有利用反折光，适于观察螺旋体的暗视野显微镜(dark-field microscope)；适用于观察活体细胞的相位差显微镜(phase-contrast microscope)；结合萤光染剂的萤光显微镜(fluorescent microscope)等。
第二节 微生物染色法
因为大部分的细菌是微小透明，必须经过染色，才能很快的在显微镜下观察到。染色乃先将检体涂薄薄一层于玻片上制成抹片，加上会与细胞特殊成份结合的化学染料；有的则再经脱色、冲洗与複染等步骤。
分为简单染色法及鑑别染色法两类。
简单染色法
简单染色法(simple stain)是使用单一染剂来染色。用以观察细菌型态或自然排列情形。
碱性染料(Basic Dye)
酸性染料(Acid Dye)
中性染料(Neutxal Dye)
碱性染料
常用的包括甲基蓝(methylene blue)、结晶紫(crystal violet)及番红(safranin)等含阳离子染剂，可与带阴性电荷的细菌核酸、细胞壁等结合。
酸性染料
常用的包括伊红(eosin)及刚果红(corgo red)等含阴离子染剂，通常做为细胞质染色之用。
中性染料
如由甲基蓝与伊红形成的複合盐类。
鑑别染色法
鑑别染色法(differential stain)是使用两种以上的染剂，可用来鑑别特殊的细菌或构造。
革兰氏染色法
耐酸性染色法
其他染色法
革兰氏染色法
此为最常用的鑑别染色法。首先以结晶紫将所有细菌染色，其次用革兰氏碘液(Gram's iodine solution)让结晶紫与细胞壁紧密结合。第三步为使用95%酒精脱色；依细胞壁成份不同，使得有些细菌原先染上的初染剂会脱掉，有些则不会。最后再以番红当对比染剂，将被脱色的细菌再染上新的颜色。
依革兰氏染色法的结果，可将细菌分为革兰氏阳性菌[G(+)]和革兰氏阴性菌[G(-)]两大类。G(+)菌细胞壁脂质含量较低，经酒精作用后，菌体的通透性相对降低，结晶紫不易脱色，因此会呈现结晶紫的蓝紫色。而G(-)菌细胞壁含较高量的脂质，当这些脂质经酒精溶解后，菌体的通透性增加，导致结晶紫被脱色，因此会呈现番红染上的红色（表2-1）。
耐酸性染色法
分枝杆菌(Mycobacterium) 如结核杆菌、痲疯杆菌等，因其细胞壁含大量脂质，无法和革兰氏染剂结合，需用此特殊法染色观察。先加热将洋红(fuchsin)与细菌细胞壁脂质紧密结合，再用含酸的酒精脱色，一般非耐酸菌会脱色，再经甲基蓝複染呈蓝色；而分枝杆菌仍保留洋红染剂，呈现红色，因此称为耐酸性染色法（图2-1）。
其他染色法
鞭毛染色法、荚膜染色法、芽孢染色法及萤光染色法等，可用于特殊的细菌种类。Wright-Giemsa染色法则用来染血液中的寄生虫。
阴性染色法
阴性染色法(negative stain)为使用印度墨汁(India ink)将背景着色，但不染菌体，便于观察有巨大荚膜的微生物（如隐球菌），以及螺旋体等不易着色的细菌
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