实习介绍之DNA制备与纯化-光学显微镜常识
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
注射用DNA制备与纯化
材料：
1. 经超高速离心分层抽取之 DNA
2. LMP agarose
3. 电泳设备
4. 5 M NaCl
5. 3 M NaOAc，pH 6.0
6. 100% 酒精
7. TE
8. phenol，phenol/chloroform（1:1 v/v）等体积混合液
9. 65℃水浴槽
10. 1 ml 注射针筒及 0.22 mm 孔径过滤膜
实验步骤：
1. 依据质体构筑时的图谱，选择适当的限制酶将质体的骨架（backbone）切除。
2. 将切割完全之 DNA 以含 EtBr 的 LMP 进行电泳分离 DNA 及骨架。
3. 待分离完成后，在(长波)紫外灯下以刀片切下欲纯化的胶，分装至微量离心管，平均每管约400 ml。
4. 将微量离心管置 65℃ 水浴槽中 约5'，观察至胶完全融解。
5. 加入 20 ml 5M NaCl，再放入 65℃ 水浴槽中约1'。
6. 取出微量离心管后，依序以phenol萃取两次、phenol/chloroform萃取一次、chloroform萃取一次。
7. 加入 1/20 体积之3 M NaOAc 及 2.5 倍体积之纯酒精沉淀。
8. 离心14000 rpm，10'后，丢弃酒精。
9. 加入 70% 酒精。接着离心14000 rpm，1' 后去酒精。
10. 风乾后溶于适量的TE。
11. 取些许之DNA定量（以胶电泳方式比对 λ/H3 之 DNA 标记）。
12. 将 DNA 之浓度以 TE 调整至 10-20 ng/ml。
13. 以 0.22 mm 孔径之过滤膜过滤后，分装小量至微量离心管，并储存于 -80℃，
尔后每进行一次显微注射即取出一小管，且不再重覆使用。
血管正面的缝合最好紮实，因为背面会比较难缝。
看起来不难
实际应该很难XD
话说那台比人还高的多人解剖体视显微镜
研究设备及器材
项目 器材名称
数量
项目
器材名称
数量
1
解剖显微镜
一台
6
地毯
一块
2
保丽龙球
数个
7
魔鬼毡
一片
3
蟑螂
数只
8
砝码
数个
4
压克力板
一片
9
木板
一块
5
铁丝
数支
10
饲育箱
四个
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