A. 受核卵母细胞的去核操作
哺乳动物的复制并非仅靠一个细胞即可达成,此一细胞必须借助卵
母细胞内所含发轫因子,将基因组再程序化作用后,始具有发育能
力。然因卵母细胞内原已拥有双套的染色体,若不加以去除,它与
注入含两套染色体的体细胞融合后,将形成四套染色体的异常现
象。因此,首要步骤是先将卵母细胞内的双套染色体去除。
B. 细胞注入卵的显微操作
利用显微操作技术,将含有正常两套染色体的单一细胞注入卵内。
C. 受核卵母细胞与注入细胞的细胞融合
供核细胞在注入卵膜间隙后,供核与受核细胞间无法自发性发生如
精卵接触后的融合现象,而必须藉由外力迫使其融合。
利用电刺激可促使细胞融合,乃因细胞经电激处理后,细胞膜表面会形成约
0.5 纳米的小孔,经证实,此小孔即为导引两细胞发生融合的媒介。
D. 融合细胞的激活处理
体细胞复制时,虽供核细胞已融入卵母细胞内,但供核细胞融入
后,并无法激发如精卵融合后所产生的激活机制,因而需要以人为
激活方式,模仿精子激活卵母细胞。利用电刺激或酒精,增加卵母
细胞内钙离子的浓度,或直接以化学试剂抑制细胞静止因子的活
性,均可激活卵母细胞