干细胞转染用标的载体DNA制备
1. 标的载体质体DNA的抽取
(a)核心建议使用“CsCl banding”抽取标的载体DNA,
(b)本核心也接受以Endofree Plasmid Maxi Kit(Qiagen)制备的DNA。
2. 标的载体DNA直线化
(a)交至核心的标的载体DNA需直线化。作法是取200 mg DNA(依“步骤1”制备)经适当的限制酶切割后,
经电泳分析确定完全直线化后,用phenol萃取两次,接着用chloroform萃取两次后,
加入1/20(vol.)5M NaCl,混合均匀后,加入2倍100%酒精沉淀,
最后将酒精沉淀的DNA送交核心进行后续实验。
(b)另外,再同时交予核心200 mg未经直线化DNA(依“步骤1”制备)