利用超薄切片机切出均匀、平整无皱褶、无刀痕、震颤的切片是电镜样品
制备中的中心环节。
切片前,包埋块要先进行整修。用刀片把包埋块修成切面呈梯形或长方形,
面积为1mm2的锥体。然后把修好的包埋块安装在超薄切片机,用玻璃刀或
金刚钻刀进行超薄切片,然后用铜网捞取。用于捞取超薄切片的铜网上附有
一层很薄的支持膜,用以支持切片样品。
超薄切片通常要经过染色才能在光学显微镜下显现出清晰的结构。这是因为
细胞主要由碳、氢、氧、氮等轻元素组成,散射电子的能力弱,未经染色时,
反差较弱,在电镜下很难分辨出细胞的精细结构。
因此必须进行染色处理,以增强样品的反差。超薄切片中常用的染色剂为铀、
铅、饿、钨等重金属盐类。经这些重金属化合物浸染之后,
不同的结构成分上吸附有不同数量的重金属原子。结合重金属较多的区域,
具有较强的电子散射能力,在电镜下呈现为电子致密的黑色;
结合重金属较少的区域,电子散射能力较弱,颜色较淡;
没有结合重金属的区域,是电子透明的区域。
因此,染色处理可以提高样品的反差,增加图象的清晰度。