冰冻切片的操作步骤-昆虫研究体视图像显微镜
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
冰冻切片的操作步骤-昆虫研究体视图像显微镜
1.将冰冻附着器连接在切片机与二氧化碳钢筒之间，旋开标本台后的开关，
再将钢筒口上的开关打开，随即不停地开、闭标本台后的开关，检查气体喷出的程度。
气体喷出时，能听到嘘嘘声，同时看到标本台上有白霜状的附着物，
这就证明钢筒贮存物确系液态二氧化碳。这时可将钢筒开关紧闭待用。若喷出气体时，
只能听到很高如金属性噪音而又无白霜物出现，这表示贮存的液态二氧化碳气体已用
尽，应即重新贮入再用。
2.将标本台用水湿润到适宜程度即将组织块(新鲜的组织快，或固定后经水洗的
组织块)放在上面。关闭标本台后的开关并将二氧化碳钢筒上的开关稍微打开，
随后再有节奏地来回开、闭标本台后的开关，使气化的二氧化碳不时从标本台喷出，
使组织块冻结。
3.在冻结组织块的同时，标本台侧面的小孔，应对着切片刀，使刀片的温度亦随着下
降并调节切片的厚度(约15-20微米)和转动标本台的升降把手，使冰冻组织块的上端与
·切片刀相接为止。
4.当组织块表面呈现轻微的溶化时即开始切片。切割后若在刀片上出现白色而脆的
飞散碎片，表示组织块太硬，若为松软的粥状则又冻结不足。为了避免这种缺点，
可将组织块冻结得稍微过硬，然后用手指按在块上，待表面轻微溶化，
即可连续切下几个适用的切片。
5.切下的切片附着在刀片上，可用湿润的毛笔将它扫入盛水的培养皿中。
切片应平摊,在水面或沉在水底。如切片卷起，应该用毛笔将它摊平。
6.将贮存切片的培养皿放在黑纸上，选择好的切片，然后把已涂梅氏蛋
白液的载玻片的一端浸在培养皿水中，用毛笔将切片带到载玻片上摊平，
将载玻片移出水面，用吸水纸吸干水分(可用手指在切片上稍压)，并立即滴几滴
纯酒精于切片上。
30秒钟后吸干酒精，再滴上另外的纯酒精，数秒钟后，继续将它吸干。
待酒精尚未干涸时，在切片上立即滴上10%的火棉胶溶液(火棉胶1克，纯酒精50毫升，乙醚50毫升)，
并随手将玻片倾斜，使多余的火棉胶溶液流掉，随即将载玻片经过83%到70%酒精处理。
至此，在切片上已形成一薄层火棉胶，切片保持在里面不易脱落了。
7.将涂有火棉胶的冰冻切片从酒精移回到水中，然后选用适合于制片目的的各种不同
的染色方法进行染色，随后依次进行脱水、透明和封藏。
采用明胶一冰冻切片法时，组织块经固定、冲珠，即浸入10%的明胶溶液(明胶2克
加入10%的苯酚水溶液20毫升).，在37℃温箱中24小时，使明胶充分透入，再移入25%的
明胶溶掖中(明胶5克加入1%的苯酚水溶液20毫升)，37℃, 12-24小时。然后用一纸盒
倾入新的25%明胶液，把组织块放入盒内摆好位置，移入冰箱中使其冷却凝固即完成包埋
过程。已凝固的明胶块用小刀修整，因明胶防碍冰冻，仅留2一3毫米的胶边，支持标本
即可。让修整好的明胶块在空气中把水分蒸发，即投入10%福尔马林榕液硬化12-24小时。
切片前将明胶块放入水中洗涤10-30分钟即可在冰冻切片机上切片，然后贴片、染
色、脱水、透明和封藏。尚须指出，用明胶包埋的切片遇90%以上的酒精时，将引起
收缩。因此，在染色和封藏时，宜采用水溶性染色剂和封藏剂。
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