直接法—就是把荧光标记的抗体直接放在具有抗原的测试标本上,
该抗原和抗体,结合达到定位的目的。
间接法—就是先将从兔子提出来的抗体与抗原在测试标本上结合,
然后再用荧光标记了的抗兔抗血清与兔子抗体结合,从而达到定位的
目的。抗兔抗血清可以预先在绵羊或山羊体内诱发制备,然后再加上
荧光标记。
间接法的优点是能够产生比直接法更强力的荧光。同时,由于标
记了的抗兔抗体已有商品供购买使用,无需自已制备,所以用间接法
来定位是比较方便,而用的人也是比较多的。
植物标本的制备
抗原与抗体的定位大多要在组织切片上进行。所以怎样制备组织
切片使细胞的结构基本保持完整无损,而同时又不影响抗原的活性,
是决定免疫荧光技术定位成功与否的一个关键环节。
大家都知道存在植物体内的抗原分子,如果不经“固定”
是很容易流失、扩散而造成假象的。但如果要把细胞抗原分子加
以“固定”,而同时又要在一定程度保持细胞结构的完整性,就非得
用一些化学固定剂如戊二醛、甲醛等来固定细胞。
但假如在固定时,浓度、时间掌握得不好,是容易使抗原分子变
性,失去与抗体结合的能力的。所以在做免疫荧光时,首先得做几个
测试实验,看看应该用什么固定剂和浓度为最适合。除了这一个问题
之外,还需要注意另一个问题,那就是要看看所用的抗体是否能够渗
入细胞与细胞内的抗原结合。