荧光显微镜的不同的光源设计都有哪些应用
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
荧光显微镜的不同的光源设计都有哪些应用
荧光显微镜
荧光显微镜（fluorescence microscope ）观察由短波光（紫外、紫、蓝等）激发
的生物物质或经荧光剂（荧光染料）标记（或染色）的物质所发生的荧光。它应具备以
下条件：①能产生短波光的光源（如高压汞灯、高压氙灯等，过去也有用弧光灯或在采
用蓝激发光时用强碘钨灯者）。②激发滤光片。用于选择激发光的波长范围，安置于光
源与聚光镜之间。常用的激发滤光片有紫外（UV）滤光片（激发光波长主要在334 ～365nm
之间），紫（V ）滤光片（激发光波长大部为405 ～430nm ），蓝（B ）滤光片（激发
光主要为蓝色，也包括一部份紫光，其波长可为405 ～435 至490nm 之间）。偶也有用
绿（G ）滤光片者（激发波长在546nm 左右）。③聚光镜、载玻片、盖玻片及物镜应尽
可能少吸收而允许紫外线通过。④吸收（护目）滤光片，置于标本与目镜之间或罩于目
镜上，用以阻挡紫外光只允许荧光进入眼球。有橙（OG）与绿（GG）等几种。一般用B
激发滤光片者可配用OG吸收滤光片；用UV激发滤光片者可配用GG吸收滤光片。⑤载玻片、
盖玻片、封盖介质、镜油等应不具有荧光杂质。⑥标本的固定、包埋等处理应能保存组
织中的荧光物质或不产生非特异性荧光。⑦荧光显微镜应在暗室内观察，或在目镜上安
装遮光罩，以阻挡外来光干扰。
荧光显微镜的装置有透射和落射两种。过去透射式装置的荧光显微镜与普通显微镜
相似，其短波的激发光可以射入物镜。现在利用暗视野聚光镜装置，不使激发的短波光
直射入物镜，而使其折光斜射于标本上，只有激发的荧光进入物镜。这种荧光显微镜在
低倍镜下比较明亮，效果较好，高倍镜时则较暗。不过其视野背景较暗，与荧光的对比
较好。落射式装置的荧光显微镜，因其物镜起了聚光镜的作用，所以视野的光均匀，且
高倍时明亮，便于观察。
使用荧光显微镜的注意事项：①光源应安装稳压器，以保持电压稳定。②注意光源
灯室，不要碰撞、漏光。如高压汞灯等高压光源一次启动不成，或关灯以后，需待半小
时再启动使用。③长时间的激发光照射可使荧光衰减或消失，所以应尽量缩短观察时间，
暂不观察期间应遮断激发光的照射。
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