显微图像分析的样品制备
DNA含量和形态学的
测量是图像分析的两个主要内容。检测目的不同,所采用的
方法和条件也有差别。
1. DNA图像分析的样本制备临床上细胞学标本主要来源于穿刺针抽吸涂片及手
术后新鲜肿瘤的组织印片。以测量DNA为目的的样本细胞,多经空气干燥后,再经中
性缓冲、福尔马林固定;对陈旧的细胞学姬姆萨染色涂片,可采用二甲苯浸泡,脱去盖
片,以甲醉退去原有染色;对存档石蜡包埋的组织,可取常规方式切片观察,也可利用
脱石蜡细胞核分散技术,获得所需测量的标本。
2. DNA显微图像术染色方法细胞内DNA染色方法有多种,在图像分析中最常
用的是Feu lgen-DNA染色法。其基本步骤包括DNA的酸解、雪夫液染色及硫化。DNA
酸解的目的是去除嗦吟集团,暴露脱氧核朴中的醛基,醛基与染液结合显色。这一过程
要求严格控制酸解条件,可选用5N盐酸,室温1小时或1N盐酸、60℃ 8分钟处理。
染色过程应在室温、避光条件下进行,时间约为2小时,硫化洗液要求新鲜配制,浸泡
30分钟后,样本经脱水、封固,便可测量。此外,荧光DNA染色法,过程基本与流式
细胞术染色相同,故不详述。