在活细胞成像中还需要考虑使用几种FP的一引起折中方
案。例如,随着颜色种类增加,数据收集的速度会下降,这
是困为每种颜色需要不同的数据收集条件。另外,随着颜色
的增加,荧光间的交叉干扰变得更加复杂,这是因为FP的发
射光谱一般很广,最后,由于不同FP间相对荧光强度不同,
每种颜色需要不同的信号整合时间,CFP 和BFP 的荧光较为
黯淡,因此可能需要更长的信号收集时间,而同样时间对于
荧光较强的GFP 和YFP 就可能过饱和了,
因此,FP实验的实验需求平衡就显得很重要(如加速收
集还是最佳分离)。例如,对于需快速收集的实验来说,使
用EY-FP 与mKO 组合就是一个不错的选择,因为这两个FP可
以共用一个激发设置;而使用组合可以提供较好的光谱分离,
还有一个办法就是使用组合,然后用代聚焦显微镜的543nm
激光激发,这样就可以同时有单波长激发和极好的光谱分离。