在显微镜下观察凋亡细胞应注意与坏死细胞相区别
信息分类：生命科学资讯 作者:YIYI发布
在显微镜下观察凋亡细胞应注意与坏死细胞相区别
杂交结束后，标本上结合的探针有特异结合的，也有非特异结合的，甚
至仅仅是物理吸附的，这些探针都会在检测过程中发出荧光。因此需要将标
本浸入洗脱液中进行振荡洗涤，以除去未结合的探针和结合较弱的非特异结
合的探针。通过调节洗脱温度、洗脱液成分(如甲酰胺浓度、离子强度)来
控制洗脱的严谨度。洗脱温度越高、甲酰胺浓度越高或者离子强度越低，则
洗脱严谨度越高，得到的信号特异性就越强，背景也就越干净，但是洗脱强
度过大可能会导致信号丢失。反之，如果洗脱强度越低，则获得的信号越
多，非特异性信号也会随之增加，背景升高。如果靶序列在标本中含量丰
富，使用直接标记探针杂交，就能获得较强的信号；假若使用的是间接标记
探针，用带有荧光素的一抗(如卵白素一FITC、抗地高辛一FrI℃)与探针
上的半抗原结合也能获得理想的荧光信号；如果靶序列含量较少，常常使用
多层免疫结合的方法来放大信号。
在光镜下观察凋亡细胞应注意与坏死细胞相区别。虽然坏死细胞的染色
质也有部分凝集和核碎裂的现象，但凝集的不均一性大大低于凋亡细胞。凋
亡细胞的胞质是浓缩，但坏死细胞是显著肿胀，也不形成凋亡小体。组织切
片中的坏死细胞大量存在，坏死灶周围伴有炎症反应，而凋亡细胞往往为单
个或者几个细胞散在分布。还应将凋亡细胞的凋亡小体与细胞中的微核区别
开。微核(Micronucleus)是由染色体断裂或断片从染色体脱落造成的染色体
异常现象。微核细胞中除主核以外，还有与主核完全不相连且染色与主核一
致的“小核”。除二者形成的原因不同外，微核位于细胞内，其成分完全是
染色体片断；而凋亡小体脱落到细胞外，是由染色质片断、细胞器和胞质成
分由细胞膜包裹而形成的圆形小体。
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