了解多肽链折叠方式的另一种研究方法
变性研究往往用来了解三维结构,大多数变性的方法和解释都
是复杂的,但是下面的例子说明所能获得的几种信息。
蛋白质的复性
复性
是了解多肽链折叠方式的另一种研究方法,因为单个氨基酸的
置换常会改变蛋白质的三维结构,自然会产生这样的观点,蛋白
质分子的结构应该完全由它的氨基酸顺序决定,这意味着由侧链
相互作用所支配的多肽链应该自发反复折叠直至达到具有最小自
由能的构象,此外,应在适当部位形成三硫键,根据这个观点,
可预期在适当条件下变性蛋白质会重新折叠形成天然分子,事实
上用核糖核酸酶已经得到这样的结果,这个蛋白质是含124个氨
基酸的单链,其中八个是半胱氨酸,形成四个二硫键,如果用变
性剂如尿素处理,然后除去尿素,立即发生复性,因为二硫键提
供了使键作适当折叠的参照点,如果还加入颈基乙醇,二硫键就
断裂,变成无规则线团,如果缓慢除去尿素和巯基乙醇,能完好
地出现复性,因为从八个半胱氨酸有105种形成二硫键的可能方
式,对这个现象的解释是这个蛋白质的折叠完全是由氨基酸顺序
决定的,因为在折叠过程中半胱氨酸片于可以配对的正确位置,
故形成了合适的二硫键,二硫键的形成并不指引折叠,这方面的
证据来自下述实验,先除去巯基乙醇,并在除去尿素前进行氧化
,也就是说,在是无规线团时进行氧化,用这个方法不能形成天
然分子。