质体转植操作流程！
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
质体转植
将质体由一种带此质体的菌种中提纯后, 再转植入另一不带此质体的菌种中, 并以此质体所带的可选择性标志来检测转植结果.
实 验：
材 料：
以提纯之含Lac Z＋之质体(并含抗生素Amp, Tetracycline或其他抗生素标志).
不含此质体, 且不能代谢Lactose之菌种.
2X transformation and storage solution(TSS).
[配方] 将40﹪(W/V)之PEG3350以LB稀释至20﹪(此PEG液及LB液均经消毒过). 且此LB液中含有10mM之MgCl2, 之后加DMSO至10﹪(V/V), 并调整pH至6.5.
LB液含20mM Glucose
方 法：
1. 将过夜成长之无Plasmid菌液, 以1：5稀释于LB液中, 使在37℃, 300rpm振盪培养箱中长1hr.
2. 取15ml上述菌液, 放入一离心管中, 加入等量之2X TSS, 缓缓溷合, 置冰上5min.
3. 离心4,000rpm, 5min倒去上清, 再加入3ml之1X TSS (以2XTSS 加消毒过之dH2O而成), 使细菌溶解.
4. 取100μl之细菌, 加5μl之质体DNA(大约1~100μg DNA即可), 充分溷合(在一个1.5ml的离心管中), 置冰上10min.
5. 加入0.9ml LB液(内含20mM glucose), 置37℃, 30min, 每隔3min溷合一次, 在以稀释涂平盘法, 将细菌涂在含IPTG, X-Gal, 及抗生素的平盘上.
6. 另取为未经转植的细菌(即步骤4时, 100μl菌加5μl之T.E.不含质体), 亦稀释涂平盘为对照组.
预期结果：大约107CFU/μg DNA结果可由此方法达到.
