限制酶切割DNA技术
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
限制酶切割DNA技术
材 料：
dH2O
10X restriction endonuclease buffer (採购限制酶时同时向厂商索取)
Gel loading buffer (通常亦随限制酶同时附赠)
方 法：
1. 将下列材料以micropipettor吸取放入一个1.5ml的离心管中：
Xul DNA (DNA的量应再0.1~0.4μg之间, 溶于dH2O或TE中)
2μl 10X restriction buffer
18-Xμl dH2O
2. 加入restriction endonuclease(每μg DNA 1~5 unit, 每unit 表示限制酶再1hr中可完全切割1μ DNA的限制酶量), 至37℃, 1hr.
3. 加入5μl gel loading buffer.
4. 依DNA电泳程序以电泳检测结果.
若是DNA要以一个以上的酶切割, 可视各酶条件, 若条件相若, 可同时加入；若条件不同如温度, 盐分等要求. 可分别切割, 先切割温度要求低的, 盐分要求低的, 再加入盐分(如1μl的1M NaCl), 或提高温度.
若是用同一个酶同时切割许多DNA标本, 可先将10X restriction endonuclease buffer, dH2O, restriction engonuclease置在另一个离心管中依总需要量溷合好, 再分别吸入不同DNA标本管中, 待切割时间到, 再加入gel loading buffer, 再进行电泳.
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