解决显微镜拍照时细胞质内荧光和细胞核内荧光不在同一焦平面的现象？
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解决显微镜拍照时细胞质内荧光和细胞核内荧光不在同一焦平面的现象？
您好我想问下怎么样解决荧光显微镜拍照的时候调胞质内荧光细胞核内荧光不能同时调清晰的来拍照的问题？
我拿构建好含基因序列的pEGFP-N3进行载体转染细胞，然后荧光显微镜来观察基因表达的亚细胞定位，然后使用Hoechst染核。
但是发现观察时细胞核和细胞质部分时同时都会有绿色荧光信号，胞质内信号占多半，还有就是拍照的时候，如果调胞质内荧光清楚了那么胞核内荧光就会变得模糊，如果把胞核内荧光调清晰了 ，胞质内荧光就会模糊。
怎样解决这个问题呢？
上海光学仪器厂：
我们在用显微镜的高倍率的物镜的时候，因为景深较浅的原因，就会出现不同部位不在同一焦平面的现象。
可采取两种方法解决：
1：对不同荧光通道分别进行调焦、拍摄，然后将各通道图片进行叠加。
2：对细胞进行Z轴拍摄，也就是说对细胞的不同焦平面进行多次拍摄，然后对这些照片进行景深扩展处理。（Z轴投影）
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