显微镜镜检之Ziehl-Neelsen染色法的抹片染色步骤！
信息分类：生命科学小百科 作者:YIYI发布
显微镜镜检之Ziehl-Neelsen染色法的抹片染色步骤！
Ziehl-Neelsen染色法：为正统carbolfuchsin染色，需在玻片下加热使染色剂溶液透到结核菌细胞壁内，所以又叫“热染法”
至少要观察300个视野，都不见抗酸菌，才能报告为阴性反应。抗酸菌细胞壁中mycolic acid 和waxes与carbolfuchsin结合成複合物，即使使用酸性酒精亦不会脱色。
抹片染色步骤如下－
Ziehl-Neelsen染色法：为正统carbolfuchsin染色，需在玻片下加热使染色剂溶液透到结核菌细胞壁内，所以又叫“热染法”
至少要观察300个视野，都不见抗酸菌，才能报告为阴性反应。抗酸菌细胞壁中mycolic acid 和waxes与carbolfuchsin结合成複合物，即使使用酸性酒精亦不会脱色。
抹片染色步骤如下－
(a) 抹片染色前必须于80℃加热15分钟，使之固定。
(b) 覆盖carbolfuchsin 染色剂(0.3 g basic fuchsin 溶于10 mL 95% ethanol， 再加入5 mL phenol和95 mL H2O，使用前，染色剂必须过滤)于抹片上。
(c) 使用酒精灯的火焰于抹片下，缓慢移动加热一分钟，可使玻片上的染色液冒出少许蒸气，但不可沸腾或者乾掉。
(d) 让染色液停留玻片上5分钟，不必再加热。
(e) 使用酸性酒精(97 mL 95% ethanol 加入3 mL HCl)于抹片上脱色3分钟。
(f) 以水冲洗，倾斜玻片，使滴乾。
(g) 覆盖甲基蓝染色液(0.3 g methylene blue溶液100 mL H2O)于抹片上一分钟。
(h) 再以水冲洗、晾乾。
(i) 以显微镜油镜(1000倍)观察红色的抗酸菌，背景或其他细菌是蓝色。
(j) 必要时，做阳性和阴性对照组染色。
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