1. 玻片的準备:做细菌抹片的玻片必须乾淨,首先要除去玻片上的油脂。处理的方法,
可用肥皂和清水擦洗或将玻片直接在火燄上过火2~3次。
2. 抹片的制备:避免制作出太厚和太密的抹片是做好抹片的首要条件。一个好的抹片必
须是乾燥后,形成一白雾状的均匀薄层。抹片制作时,细菌是培养在液态培养基
(liquid medium)或固态培养基(solid medium)中,有不同的操作方法。
(1) 液态培养基:以无菌操作方法,用接种环挑取悬浮菌液至玻片抹开,成为约1公分圆环。
(2) 固态培养基:先挑一滴无菌水在玻片的中央,再用接种环从固态培养基挑取一点点的
菌,在含有一滴水的位置,由中央往外轻而均匀的抹开。
3. 加热固定:除非将抹片固定,否则在染色的过程中,细菌将会被冲洗掉。加热固定的
方法为将玻片直接快速在火燄上过火2~3分钟等待液体蒸发即可(切勿火烤过久,以免破坏菌体原本结构)。
4. 置1~2滴染剂于抹片处,静置适当时间,约1~3分钟。
5. 开启水龙头的自来水冲洗掉抹片上多馀的染剂(由玻片上缘轻轻冲洗至无色即可)。
6. 乾燥(室温下自行风乾或在火燄上过火乾燥)。
7. 镜检,在抹片处滴上香杉油,再利用物镜100x的油镜(oil immersion)观察。
8. 观察完毕,请用二甲苯将100x物镜擦拭乾淨。