革兰氏鉴别染色法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌!
革兰氏染色法(Gram Stain)
一、 目的
利用革兰氏鉴别染色法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
二、 原理
革兰氏染色的原理,需要四种试剂加至抹片上,第一种试剂以结晶紫
(crystal violet)做初染(primary stain),初染的功能是使所有细菌染上颜色。第二种
试剂使用媒染剂(mordant),利用革兰氏碘溶液(Gram's iodine solution)与结晶紫作用
形成不可溶複合物(complex),以加强染剂染色的能力。第三种试剂是以95%酒精
(95% alcohol)做为脱色剂(decolorizing agent),因细胞壁结构和成分组成不同,使得
有些初染剂可被脱掉,有些则不可以被脱掉。第四种试剂以番红(safranin)做为对照染
剂(counter stain),和初染剂呈对比的颜色,当脱色后,若对照染剂不被细菌所吸收,
则仍维持初染剂的颜色,若对照染剂会被细菌所吸收,则呈现对照染剂的颜色。以此方
法可将细菌作分类。
三、 实验材料
1. 细菌的培养:以nutrient agar plate(或broth)培养Escherichia coli,
Staphylococcus aureus等24小时内的新鲜培养菌。
2. 试剂:crystal violet,Gram's iodine,95% alcohol和safranin O
(或carbolfuchsin),Cedarwood oil,xylene。