大肠杆菌的培养用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
大肠杆菌(Escherichia coli)的培养
以LB培养液(Luria或Lenox broth)培养E.Coli, 高温高压消毒后使用.
若製作平盘或洋菜斜面, 则在上述成分外, 再加1.5﹪(w/v)的洋菜粉.若尚需加入抗生素等, 可在消毒后, 待液体冷却至约50℃时, 加入溷和.
若製作软洋菜覆盖层之洋菜, 则用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可. 一般若添加抗生素, 其浓度如下：
储存液浓度
使用液浓度
Ampicillin
4mg/ml
50μg/ml
Chloramphenicol
10mg/ml
(溶于甲醇)
20μg/ml
若是加其他化合物, 参考浓度如下：
储存浓度
使用液浓度
Isopropyl-I-
100mM
0.1mM
thio-β-D-
(23.8mg/ml)
(每平盘加储存液40μl)
galactoside (IPTG)
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-
20mg/ml
20ug/ml
galactoside(X-ga
(溶于N.N.dimethyl)
(每平盘加储存液100μl)
l)
Formamide
将E.coli培养在LB中, 37℃, 300rpm, 振盪培养过夜, 可得约 1-2×107cells/ml, 亦可用光谱仪测0D600, 大约每0.10D相当108cells/ml, 亦可用稀释涂平盘法计算Colony Forming Unit (CFU)/ml, 若想分离此菌, 可以稀释涂平法或平盘划线法为之. 保存此菌, 可将此菌加入下列两种溶液中任一种, 并保存在-70℃, 需用时, 吸取部分, 用于培养即可.
溶液一：glycerol solution
65﹪glycerol (v/v)
0.1M MgSO4
0.025M Tris.Cl, pH8
溶液二：DMSO Solution
7﹪(v/v) dimethylsulforide (DMSO)
※溶液一需经高温高压消毒, 溶液二不必.
实 验：E.coli成长曲线
材料与方法：
LB培养液及平盘
E.coli
自动计时器
生理实盐水(0.9﹪)4.9ml in 13×100螺盖试管(均经消毒)
Micropipettor
pipette tips
Spreader
37℃ incubatorn
37℃恆温振盪培养箱
本生灯
酒精
以稀释涂平盘法为之, 每30min计数一次, 以180分钟为之.
