以紫外线取得酵母菌突变种
信息分类：生命科学资讯 作者:yiyi发布
以紫外线取得酵母菌突变种
材 料：
YPD medium及plates
选择mutants的plates(自行设计)
或以温度选择temperature sensitive metants
UV灯(使用UV灯时应戴安全眼镜)
方 法：
1. 将一种yeast长在5ml YPD medium中过夜, 30℃振盪300rpm.
2. 取1.5ml yeast液, 以微量离心机, 最高速离心5sec, 倒去上清, 再以dH2O(消毒过)洗2次. 之后将细胞溶于1ml dH2O中.
3. 测OD600, 若介于2.5~3.0, 则细胞述大约为8×107cells/ml, 将细胞逐次稀释置2,000cells/ml, 再以0.1ml涂皿.
4. 将涂有Yeasts的皿(保留2个为对照组), 置UV灯下, 照使达300eg/mm2, 再放室温, 长3天. 对照组为测其生存之用.
5. 取消毒过的圆形滤纸, 做replica-plate, 将一个皿放室温, 一个放37℃, 长3天. 凡在室温有长而37℃不长的可能就是temperature sensitive colonies, 此一步骤或以抗药性来选出抗药性突变种亦同.
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