共聚焦显微镜冰冻标本制作技巧
首先是用特异性的抗体标记血管、细胞和神经，最好是用三种 不同的荧光标记的抗体；观察时我想要用软件三维重建来处理，因为共聚焦显微镜获得的图像是很薄的，应该不能恰巧同时看到这许多结构。
标本似乎没有特别的要求，冰冻切片应该是个好选择，有一点，共聚焦显微镜只能观察大约50um厚的距离，再深处的结构由于组织对激光和荧光的阻挡而衰减，就看不到了，所以，想要观察的结构不能太深，这也与选择的荧光有关系，长波长的荧光(红色）的更利于观察深处的结构。 
用confocal观察的冰冻切片一般是封片在玻片上置于正置显微镜下采集图像，要求厚一些主要是怕封片的时候漂片，没办法扫到完整的平面。
一般标记血管可用cd31,cd34,vWF,等,原组织可用DAPI类染核.用缓冲甘油封片. 
但是一般也不超过20um（我们的实验体会）。
用10um的冰冻切片进行贴片，然后荧光双染，最后在confocal是可以观察的。我们的脑片大部分都是这个厚度，效果不错。
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