显微镜百科 -用分光光度计估计菌液浓度时,如何确定?
用分光光度计估计菌液浓度时,如何确定?
信息分类:技术应用 日期: 2011-7-16 10:11:56
用分光光度计估计菌液浓度时,如何确定?
挑选出一个最适合的波长来测定样品的混浊度。透光度和吸光值实际上所表达的是一个意思,
就象给你一碗饭,问你吃了多少和剩了多少一样。
因为你现在不知道需要在什么波长下测定,所以需要找出一个对你样品最灵敏的波长。
最好的方法是找到有关文献,这样将来也有凭据。找不到只能自己找。比如说将你的样品放入仪器中,
先选一个波长测一下,如果你用透光率作为指标,则数值越小说明该样品对该波长越灵敏,
用吸收值则相反。用不同的波长测定,直到找出最灵敏的波长作为实际测定的条件。
如果你的分光光度计够高级,就可以自动扫描该样品的吸收图谱,这样就不用自己手动一个一个测了。
还要注意,找到最佳波长后,如果你的样品的吸收值不在0.3~0.8之间的话,说明样品浓度不合适,需要稀释或浓缩。手动寻找波长时,每换一个波长都要等待机器稳定15min,所以是很费时间的。
但愿你能找到文献或有高级仪器。
细菌生长情况通常用分光光度计来检测,但很难给出确定的细胞数和OD值的对应关系来,细菌密度受很多因素影响,如菌株种类,摇速等。不同菌株在特定的波长处显现出不同的吸收值(如600或436nm)。
大肠杆菌培养物 一般使用OD600的吸收值.
检测OD值时,应使OD值在0.05到0.3 之间,如果数值超过0.3,则应该稀释样品。
下面的数值可作为粗略的估计:
大肠杆菌培养物 1 x 109 cells/ml, 1:4稀释,OD600值使用Beckman DU-7400检测时为0.25,使用Beckman DU-40检测时为0.125 。