角膜上皮细胞的原代培养步骤总结

采用组织块培养法进行家兔角膜上皮细胞的原代培养。
选择重1. 5～2. 0 kg 的新西兰白色健康家兔,用空气栓塞处死后迅速取下眼球,用1/ 5000 氧氰化汞和生理盐水冲洗眼球。在超净工作台上无菌操作,沿角膜缘取下角膜,在解剖显微镜下完整剥离角膜内皮,用剪刀剪取剩余的组织至2 mm 大小块,接种到培养瓶中,基质面朝下,上皮面朝上,放入37 ℃、5 % CO2 培养箱中干涸2 h后,加入适量培养液进行培养,每周更换培养液2次,待细胞汇成片后用消化液消化传代。培养液成分为RPMI-1640 培养液,内含10 %新生牛血清、青霉素100 U/ ml 、链霉素100μg/ ml ,pH 值7. 2～7. 4 ,消化液为0. 2 %胰蛋白酶和0. 02 % EDTA 的等体积混合液。
每天用倒置显微镜观察,角膜组织接种24 h 后即有角膜上皮细胞自组织块边缘移行并增生,1 w 后细胞生长分裂旺盛,细胞变成不规则的多边形,约2 w 后细胞汇合成单细胞片

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解剖显微镜在脑片培养中的应用