显微镜百科 -鼠前列腺增生模型制备
鼠前列腺增生模型制备
信息分类:新闻中心 日期: 2011-8-1 10:08:58
鼠前列腺增生模型制备
方法:孕16~18 d的近交系BALB/C小鼠经脱颈离断处死,取出胚胎,在含在青霉素和链霉素的0℃~4℃ Dehank液中,体视显微镜,用于准确地取材。
于立体显微镜下微解剖,修剪掉胚胎膀胱,Wolffian和Mullerian管,剩下完整的尿生殖窦(Urogenital sinus,UGS)。将UGS置入1%的胰蛋白酶溶液中,4℃,消化120 min,以去掉上皮成分保留UGM。用含50%的小牛血清培养液清洗,终止胰蛋白酶的消化作用。制备好的UGM保存于Dehank培养液中,3 h内使用。整个操作过程均在无菌条件下进行[1]。
为验证制备的UGM符合本实验要求,将UGM作如下研究:①解剖显微镜下,观察UGM是否残留有Wolffian和Mullerian管等附属结构;②UGM连续切片,HE染色观察是否残存上皮成分;③为进一步证明消化后的UGM无上皮成分并具有活性,将UGM种植于同系雄鼠肾包膜下,四周后切取移植物,作连续切片,HE染色观察。
1.2 动物接种
成年雄性近交系BALB/C小鼠30只,随机分为:正常对照组,假手术组,UGM种殖组,每组10只。乙醚吸入麻醉,妥善将鼠固定于操作台。腹正中切开,暴露膀胱及腹侧前列腺,将制备好的UGM种植于腹侧前列腺内。假手术组除不种植UGM外,余步骤同上。
1.3 观察方法
接种后,普通喂养,30 d处死动物,取出腹侧前列腺,称其湿重,计算出各组前列腺湿重的平均值。前列腺标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色。
1.4 统计学处理
各组前列腺湿重以±s表示,均数间比较采用t检验。
2 结果
2.1 制备的UGM
制备的UGM在解剖显微镜及下HE染色观察,无残存附属结构,无上皮细胞存在,见图1。UGM在肾包膜下长生四周后,切取并作HE染色观察,细胞形态与接种前一致,无腺样结构。进一步说明无上皮成分,并具有活性,符合本实验要求。